2013-09-2015-06,華中農業大學,預防獸醫專業,碩士 2013.07-2014.03 豬肺炎支原體P36蛋白單克隆抗體的制備及鑒定 將pET-28a(+)-P36成功轉入大腸桿菌BL21(DE3),優化表達條件以可溶性形式高效表達;使用AKTA FPLC(Amersham Biosciences UPC-900)快速純化液相色譜系統對蛋白進行Ni柱親和純化;復蘇培養Mhp168株F109代,進行CCU測定,制備Mhp全菌蛋白用于后續單抗篩選與驗證;通過免疫小鼠、細胞融合、有限稀釋法克隆陽性細胞孔、Western blot驗證特異性得獲得雜交瘤細胞株;采用辛酸-飽和硫酸銨沉淀法對在小鼠體內誘生的腹水進行純化,獲得4株高效價高純度的單抗。 2014.03-2014.05 建立豬肺炎支原體雙抗體夾心ELISA與熒光定量PCR檢測方法 HRP酶標單抗,使用Mhp全菌蛋白建立優化雙抗體夾心ELISA,但無法檢測到臨床鼻拭子樣品中的Mhp;設計Mhp P36基因的熒光定量引物和探針,成功建立FQ-PCR標準曲線,但敏感性不高,課題中斷。 2014.06-2015.03 按照新獸藥申請材料開展豬肺炎支原體間接ELISA檢測試劑盒的研發 成功表達純化多批Mhp的三聯融合蛋白,用作包被抗原建立間接ELISA,增加檢測方法的敏感性;摸索ELISA方法的最佳反應條件,判定陰陽性界值,評價方法的特異性、敏感性、重復性和穩定性;將所建立的ELISA方法與IDEXX試劑盒共同檢測大量臨床血清樣品,結果符合率高。 2008-09-2013-06,華中農業大學,動物醫學專業,本科 2012.11-2013.04 豬圓環病毒2型 ORF2基因在昆蟲細胞中的表達及其優化 PCR擴增ORF2基因,成功構建pVL1392-ORF2表達質粒;熟悉掌握Sf9昆蟲細胞的傳代培養;將表達質粒與線性化桿狀病毒DNA共轉染Sf9,經多次擴增獲得高滴度的重組病毒;Western blot檢測不同感染復數下細胞培養液上清和細胞內的蛋白表達量。
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